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PhiC31定点插入转基因
PhiC31定点插入转基因      

      PhiC31位点特异性整合酶来源于PhiC31噬菌体,它能介导位于噬菌体自身环状基因组上的attP (attachment-P) 位点,与位于变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)环状基因组上的attB (attachment-B)位点之间发生重组。利用这个原理,研究者最先在细菌、酵母、和哺乳动物细胞中实现了,在PhiC31整合酶的催化下将包含attB位点序列的质粒整合到包含attP位点(或称为docking site,锚定位点)的基因组上。2014年Groth等人首次证明利用PhiC31整合系统,在果蝇细胞或胚胎中也能高效地实现转基因。这对于果蝇转基因技术,无论在效率和应用范围方面都是一次重要的升级。PhiC31定点插入相对于P因子随机插入转基因技术具有几个优势:1. 可选择转基因插入的位置;2. 可以将更大的片段整合到果蝇基因组;3. Recombineering,改造后的系统更便于研究。   

      果蝇中的PhiC31整合系统由3部分构成:(1) PhiC31整合酶;(2) attP果蝇品系;(3) 带有attB序列的注射质粒。PhiC31整合酶可通过注射外源PhiC31整合酶mRNA来提供,或者通过转基因将整合酶基因整合到果蝇基因组上,从而让胚胎自身表达提供整合酶。attP果蝇品系是通过转座子转基因技术(比如P因子, piggyBac, Mariner转座子),构建的带有attP位点的果蝇品系。attB质粒除了含attB位点,还被克隆上去了需要整合到基因组上的目的片段。这样,在PhiC31整合酶的催化下,注射质粒上的attB位点与基因组上的attP位点之间发生重组,从而将质粒上的序列完全整合到基因组上,并在序列两端形成新的杂合位点attL和attR(如下图),但attL与attR不能介导新的重组,因此PhiC31介导的转基因过程是不可逆的。  
 





  目前,我们最常用的attP果蝇品系是attP2(BDSC# 25710)和attP40(BDSC# 25709),可以快速稳定高效地获得定点插入转基因果蝇。如果客户希望将目的片段整合到特定的attP品系,可以将果蝇寄给我们进行扩增然后进行注射。另外,我们免费提供balancer杂交及鉴定服务(我们有FM7a,Bc/Cyo,TM3/TM6b等balancer品系),如果客户需要与指定的品系进行杂交,可提前将果蝇寄给我们进行扩增。PhiC31定点插入转基因的服务内容及价格请参考下表:








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